Resumo Ainda hoje, um teste diagnóstico eficaz para aspergilose em pinguins não é conhecido, sendo o padrão-ouro os exames post-mortem. O antígeno fúngico galactomanana (GM) tem sido utilizado como biomarcador da doença em humanos, sendo detectado pelo Platelia Aspergillus EIA (BioRad)®, um kit comercial que se baseia na técnica ELISA sanduíche. É padronizado para utilização em pacientes neutropênicos, no entanto estudos tem demonstrado sua possível utilidade também para aves.O objetivo de nosso estudo foi avaliar a eficácia do teste Platelia Aspergillus EIA® (BioRad-US) no diagnóstico da aspergilose em pinguins-de-Magalhães, determinando sensibilidade, especificidade e valores preditivos positivos e negativos em diferentes pontos de corte. Foram incluídas no estudo, amostras de soro sanguíneo (n=29) de pinguins-de-Magalhães em cativeiro que vieram a óbito por aspergilose. A detecção de GM foi realizada seguindo instruções do fabricante e o índice de GM foi obtido dividindo o valor da média da DO da duplicata da amostra clínica pelo valor da média da DO da duplicata da amostra de cut-off fornecida pelo kit. Através de informações em banco de dados foram obtidos resultados sobre a presença de anticorpos anti-Aspergillus fumigatus, detectada por Imunodifusão em gel de ágar (IDGA) em todas as amostras séricas. Os resultados foram analisados utilizando-se teste de qui-quadrado e Kruskal-Wallis a partir do programa estatístico SPSS 20.0, IBM®. Curva ROC foi obtida e a partir desta, taxas de sensibilidade, especificidade, valores preditivo positivo e negativo foram igualmente calculados considerando quatro diferentes pontos de corte (0.5, 1.0, 1.5 e 2.0). O índice de GM sérica não diferiu entre os animais do grupo caso e controle (pKW = 0.097). Na determinação da curva ROC para detecção de GM sérica o valor da área sobre a curva foi de 0.635. A partir dos valores determinados pelas coordenadas da curva, quatro diferentes pontos de corte (0.5, 1.0, 1.5 e 2.0) foram analisados, resultando em taxas de sensibilidade variando de 86.2% a 34.5%, e de especificidade entre 87% e 26.1%. Ao comparar o índice de GM sérica nos animais do grupo caso quanto a presença ou não de anticorpos detectados pela IDGA foi encontrado p=0.503. A detecção de GM pelo teste Platelia Aspergillus EIA® não parece ser útil para o diagnóstico da aspergilose em pinguins naturalmente infectados.

Abstract Even today, an effective diagnostic test for aspergillosis in penguins is unknown, being the gold standard post-mortem examinations. The fungal antigen galactomannan (GM) has been used as a biomarker of disease in humans and is detected by the Platelia Aspergillus EIA (BioRad)®, a commercial kit based on the sandwich ELISA technique. It is standardized for use in neutropenic patients, however studies have demonstrated its usefulness also possible for birds. The aim of our study was to evaluate the effectiveness of Platelia Aspergillus EIA® test (BioRad-US) in the diagnosis of aspergillosis in Magellanic penguins, determining sensitivity, specificity, and positive and negative predictive values for different cut-off points. Were included in the study, blood serum samples (n = 29) Magellanic penguins in captivity that died by aspergillosis. Detection of GM was performed following manufacturer's instructions and the GM index was obtained by dividing the average value of OD of the duplicate of the clinical sample by duplicate OD of the average value of the cut-off sample provided by the kit. Through information database results were obtained for the presence of anti-Aspergillus fumigatus antibodies detected by agar gel immunodiffusion (AGID) for all serum samples. Results were analyzed using chi-square test and Kruskal-Wallis from SPSS 20.0, IBM®. ROC curve was obtained and from this, rates of sensitivity, specificity, positive and negative predictive values were also calculated based on four different cutoff points (0.5, 1.0, 1.5 and 2.0). The serum GM index did not differ between animals of the case and control group (pkw =0.097). In determining the ROC curve for serum GM detection the value of area under the curve was 0.635. From the values determined by the coordinate of the curve, four different cut points (0.5, 1.0, 1.5 and 2.0) were analyzed, resulting in sensitivity rates ranging from 86.2 to 34.5% % and specificity between 87% and 26.1%. By comparing the serum GM index in group case as the presence or absence of antibodies detected by AGID was found p=0.503. The detection of GM the Platelia Aspergillus EIA® test seems is not be useful for the diagnosis of aspergillosis in naturally infected penguins.

Resumo As infecções por leveduras têm adquirido grande importância, devido ao aumento da sua frequência em pacientes imunocomprometidos ou pacientes submetidos a técnicas diagnosticas e terapêuticas agressivas, e devido sua alta morbidade e mortalidade. Paralelamente tem-se observado um incremento na aparição de novas espécies patógenas difíceis de diagnosticar e tratar. O objetivo desse estudo foi avaliar a suscetibilidade in vitro de 89 leveduras de diferentes origens frente aos antifúngicos Anfotericina B, Voriconazol, Fluconazol e Fluocitocina pelo Sistema Vitek® 2. O antifungigrama foi realizado automaticamente pelo Vitek® 2 Compact. A origem das leveduras foi: Grupo 1- Microbiota de Animais Silvestres (S) (26/89), 2- Leite com mastite bovina subclínica (L) (27/89) e 3- Ambiente Hospitalar (H) (36/89). Das 89 leveduras submetidas à carta Vitek®, 25 (20.09%) foram resistentes ao fluconazol, oito (8.99%) à anfotericina B, três (3.37%) ao voriconazol, e nenhuma amostra mostrou-se resistente a fluocitosina. O grupo três (H) foi mais resistente ao fluconazol que os demais, já o dois (L) foi mais resistente ao voriconazol e a anfotericina B que os outros dois. O fluconazol pode ter apresentado maior número de resistências devido ser um fármaco comumente usado principalmente em humanos. As leveduras isoladas de humanos apresentaram maior número de resistências aos fármacos testados do que as leveduras isoladas de animais silvestres. O que pode ocorrer devido a uma maior exposição dos humanos aos fármacos em relação aos animais que vivem isolados em ambientes selvagens e na maioria dos casos nunca teve contato com fármacos de qualquer origem.

Abstract Yeast infections have acquired great importance due to increasing frequency in immunocompromised patients or patients undergoing invasive diagnostic and therapeutic techniques, and also because of its high morbidity and mortality. At the same time, it has been seen an increase in the emergence of new pathogenic species difficult to diagnose and treat. The aim of this study was to determine the in vitro susceptibility of 89 yeasts from different sources against the antifungals amphotericin B, voriconazole, fluconazole and flucytosine, using the VITEK® 2 Compact system. The antifungal susceptibility was performed automatically by the Vitek® 2 Compact system. The origin of the yeasts was: Group 1 - microbiota of wild animals (W) (26/89), 2 - cow’s milk with subclinical mastitis (M) (27/89) and 3 - hospital enviorment (H) (36/89). Of the 89 yeasts submitted to the Vitek® 2 test, 25 (20.9%) were resistant to fluconazole, 11 (12.36%) to amphotericin B, 3 (3.37%) to voriconazole, and no sample was resistant to flucytosine. Regarding the minimum inhibitory concentration (MIC), fluconazole showed an MIC between 1 and 64 mg/mL for the three groups, voriconazole had an MIC between 0.12 and 8 mg/mL, amphotericin B had an MIC between 0.25 and 4 mg/mL for group H and group W respectively, between 0.25 and 16 mg/mL for group M and flucytosine had an MIC equal to 1μg/mL for all groups. The yeasts isolated from the H group showed the highest resistance to fluconazole 12/89 (13.49%), followed by group W (7.87%) and group M (5.62%). The more resistant group to voriconazole was followed by the M and H groups, the W group showed no resistance to this antifungal. Group H was the least resistant (2.25%) to amphotericin.

Yeasts are commensal organisms frequently isolated from the skin and mucous membranes of domestic and wild mammals. Although yeasts are frequently isolated from women’s vaginal mucus, similar studies in canine are rare, therefore their behaviour during the canine oestrous cycle is unknown. The purpose of this study was to isolate yeasts from the vaginal microbiota of bitches and to evaluate their behaviour in different stages of the oestrous cycle. We examined 75 samples of mucus from the vaginal cavity of 75 domestic bitches and 224 samples from 14 experimental bitches. The stages of the oestrous cycle were characterized through vaginal cytology and clinical observation of bleeding, vulvar oedema and pucker. Samples were examined visually, and also cultured in Sabouraud dextrose agar with chloranphenicol, at 37 ºC for 10 days. The yeasts were classified according to their macro and micro morphology, biochemical tests, germination tube and micro culture. Yeasts were isolated from 25 (33.3%) samples from domestic females. Among the samples collected during proestrous, oestrous, diestrous and anestrous, 56.3% 16.7% 66.7% and 20.5% were positive, respectively. Yeasts were isolated from 147 (65.6%) samples from experimental bitches. Among the samples collected during proestrous, oestrous, diestrous and anestrous, positive samples represented 61.9%, 71.9%, 82.7%, and 57.1%, respectively. The identified species were Candida spp, M. pachydermatis and Rhodotorula spp, which are commonly present in the vaginal mucus microbiota of healthy bitches and their frequency changes with the different stages of the oestrous cycle.

Hongos levaduriformes son aislados frecuentemente de los animales domésticos y silvestres, siendo algunos comensales del tegumento y mucosas. Las levaduras son frecuentes en la mucosa vaginal de las mujeres, pero en perras son escasos los estudios referentes a la microbiota fúngica vaginal, sin conocerse su relación con el ciclo reproductivo. En este estudio se buscó aislar e identificar levaduras de la microbiota vaginal de perras, y establecer si hay alteración de la microbiota levaduriforme en las fases del ciclo reproductivo. Se analizaron 75 muestras de la vagina de 75 perras de los caniles particulares (Grupo I) y 224 muestras de 14 perras experimentales (Grupo II). El ciclo estral fue determinado por citología vaginal y se registraron observaciones clínicas como sangrado, edema y pliegues de vulva. Las muestras fueron sometidas a examen directo y cultivos en Agar-Sabouraud dextrosa con cloranfenicol, a 37 ºC por 10 días. Las levaduras fueron clasificadas por macro y micromorfología, pruebas bioquímicas, tubo germinativo y microcultivo. De las 75 muestras del grupo I, el aislamiento fue 33,3% (n = 25); las muestras fueron obtenidas en las fases de proestro 56,3%, estro 16,7%, diestro 66,7% y anestro 20,5%, respectivamente. De las 224 muestras del grupo II se aislaron levaduras en 147 (65,6%): en proestro 61,9%, estro 71,9%, diestro 82,7% y anestro 57,1%, respectivamente. Las levaduras fueron identificadas como Candida spp, Malassezia pachydermatis y Rhodoturola spp. Los resultados sugieren que estas levaduras forman parte de la microbiota vaginal de perras sanas y sus frecuencias se alteran en las fases del ciclo reproductivo.